宛兒In The House

蝴蝶蘭的無菌播種

一、前言

        臺灣南部為蝴蝶蘭的原生地之一，其他原生地分佈於菲律賓群島、澳洲、新幾內亞、印尼、馬來西亞、泰國、越南、中國雲南、四川、海南島等區域，全球約有50個原生種。過去二十多年以來，由於民間趣味者的栽培及育種，加上水牆溫室及新栽培技術的引進，使臺灣地區的蝴蝶蘭生產形成一個產業，其產值約為每年30-40億元 (李、2002)。主要市場在日本、美國、中國大陸、歐洲等國家。蝴蝶蘭之品種種類相當多，主要由蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)、及該屬與朵麗蘭屬(Doritis) 雜交之屬間雜種 (Doritaenopsis)。目前蝴蝶蘭盆花在荷蘭及美國盆花市場均已躍居領先地位，荷蘭之蝴蝶蘭公司更積極投入組織培養量產及品種選育；而我國在過去由公家機構或大學進行之蝴蝶蘭相關研究，著重於開花調節 (李哖、1986) 及栽培管理技術，組織培養或無菌播種及幼苗生長雖已有研究報告發表 (涂、李，1987；王、李，1991；Hinnen et al., 1989；Ichihashi, 1997；Tanaka, 1992；Tsai et al., 1992)，對於擬新投入蝴蝶蘭之業者，仍需重新摸索技術，且即使產業界早已經能夠進行量產瓶苗，其組培關鍵技術均被視為產業機密，且組織培養過程待解決的問題仍然不少，例如如何降低組織培養變異、提高增殖倍率、提高產品品質及生產效率等，均有待進一步建立作業程序開發相關技術，以便產業界能參考使用。

二、材料及方法

I、     材料：培養基、吸管（已滅菌）、濾紙、刀架、鑷子、本生燈、２５０ｍｌ三角瓶、漏斗、試管、無菌操作台、無菌水７０％、酒精０﹒５％、次氯酸鈉、蘭花種子。

II、 方法：無菌播種（已成熟種子）

①.      器具和種子消毒：

1.  配置７０％酒精

2.  無菌操作台噴以７０％酒精，再用沾溼７０％酒精紗布擦拭

3.  器具消毒：刀架、鑷子以本生燈滅菌後放置於無菌操作台冷卻備用

4.  配置０﹒５％次氯酸鈉溶液５０ｍｌ於燒杯中。

5.  將蘭花種子放入小試管內，倒入少許０﹒５％次氯酸鈉溶液，以手封蓋用力震盪１分鐘。

6.  無菌操作台上取２５０ｍｌ三角瓶上置漏斗，將濾紙放入漏斗內。

7.  無菌操作台上將蘭花種子倒入漏斗內，試管內可用０﹒５％次氯酸鈉溶液涮洗數次至完全乾淨為止。

8.  次氯酸鈉消毒時間為１０－１５分鐘後（由種子放入次氯酸鈉至漏完為止），加入無菌水反覆沖洗３－５次。以吸管吸取無菌水將種子沖入濾紙底部。

②.      無菌播種：

1.  培養基外部以酒精擦拭無菌操作台打開鋁箔蓋。

2.  以鑷子夾取少許種子（約綠豆大小）放入培養基上。

3.  以吸管吸取無菌水約５滴滴於培養基上形成水的薄膜。

4.  瓶口封蓋後以火烤殺菌。

5.  輕輕搖動培養瓶使種子散開。

6.  置於培養架上初期培養在低光度環境３００－５００ｌｕｘ，發芽後光照度改用２０００－３０００ｌｕｘ。

7.  每週記錄培養基中種子存活數、發芽數、萌芽時間、生長發育情形。

三、試驗結果

四、討論

　　蝴蝶蘭實驗最主要要注意的地方，就是消毒的步驟，過程缺一不可，只要有任何一點細菌，便有可能會使培養基受到感染，本次本組的培養基製作全數成功，皆未出現發霉或受感染的錐型瓶，可見在實驗的過程中組員皆很小心謹慎，才有這麼多留存的數量；蝴蝶蘭播種是最早做的實驗項目，但觀察了一個學期並沒有特別明顯的差異，只在接近學期末時，培養基上出現了些微凸起的顆粒，有點像大蒜剛發芽時期，芽體會先凸起數公分一樣，但其實外表上還是與初製作時無太大差異，可能需更長時間的觀察。